脐带组织块贴壁法求助

老姜

回复 湖南干细胞 的帖子
# ?5 n) G& X9 b# |& t3 v' W" f; [
你用低面积多大的培养瓶养细胞，Ｔ２５总量只能加５ｍｌ液体，Ｔ７５加９ｍｌ还行，平底若铺了血清应该将血清晾干放组织块不漂的可能性才大，液体加多了，浮力大自然漂。培养瓶培养挑出组织块是不易操作的。培养细胞血清的浓度不是愈多愈好，最终不超过２０％为佳，因为体内废物的清除通过血液，血清中的含量也不能忽视。物极必反！

spring1221

回复 湖南干细胞 的帖子# N4 a( U' W2 m+ U6 h+ ~3 h* L

: T9 j) U/ c$ B  J1 H第一次加液有组织块飘起来是正常的，建议加液时间再延后一点，倒置24小时后加液，贴壁时间太短，加液后就很容易让组织块浮动。组织贴壁法筛选的间充质细胞纯度比较高，也比较容易操作，有些文献报到动静脉跟表皮清除不干净都可以长出来，所以关键还是培养液的选择跟操作熟练度。祝你早日成功

湖南干细胞

回复 老姜 的帖子
1 b- z! z: o( t, b0 M' [, F) P/ B& k0 W9 n
谢谢，换液前不敢动了。但是第一次组织块添加液体前就飘了好多。

湖南干细胞

组织块贴壁法培养皿要铺多聚不？用玻璃的还是塑料的？2 Z$ L8 f2 u$ q+ n) s% U0 a, ^" R

湖南干细胞

回复 单个核细胞 的帖子
2 h2 }( Y% q' H& M3 d! l$ a" |
% w! j5 `: U" N0 d谢谢。1）脐带在半小时内开始操作，PBS冲洗3次后，剥离动静脉，撕出白色胶块（时间1-2小时）；2）剪碎（0.5-1小时）成0.5-3mm小块，倒入离心管，PBS 1000rmp，5min洗涤1次，添加1ml 培养液，组织块倒入到FBS包被的培养瓶中，9小时后添加培养液至没过组织块，此时已经有细胞爬出，并且很多组织块都漂浮 ，1天后大量细胞爬出，3天后半量换液，换液后细胞仍在，第5天细胞就基本上消失了，只有完全漂浮组织块及细胞碎片。没有每天动培养瓶，组织块就是贴壁不紧。

老姜

回复 湖南干细胞 的帖子
( f$ @% u5 w' A8 P/ B
( k5 v) @* f9 P2 O# q你不妨将组织块用PBS洗涤后，直接加在新的干皿上（实质组织块还是湿润的），量要少于你第一张照片上的量，放入培养箱中3h后，轻轻加入8ml生长液，直接放入培养箱内，4-5天半量换液（这期间不要拿出来看呀，找相呀，太折腾了，它没法贴安身)以后三天半量换液，直到12或15天后，再根据细胞生长状况决定是否吸弃组织块。

单个核细胞

2 Y. m  I3 T  R9 k* N$ v; @0 s) h
6 F, V. z  [3 j* ?  Q回复 湖南干细胞 的帖子4 J" x" y7 Y3 ?+ m" }: e' n

. v  C$ s, g. _, Q. I) n- s: _组织贴壁9小时就能爬出细胞？你说的是这个意思吗？你可以描述一下你的培养过程，如组织贴壁时间、加液时间、组织周围爬出细胞时间、换液时间等等。这样大家才能知道你的困惑帮你解决问题。" L: e( n! T% ^* W$ t
, v, R; r" Z+ K5 f
另，参考下面的链接：
5 L) q4 U2 ?; p8 u
( i+ C0 A: `  A0 z! P1 A3 ^: C* n% U1 e脐带间充质干细胞的贴壁分离方法：* G/ {+ {6 B# o- E
http://www.stemcell8.cn/forum.ph ... mp;page=1#pid554020: d0 {7 }# a' V/ U0 Z
请教华通氏胶的剥离：
/ Y" ?/ ]' W% ihttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html6 Z4 |- p6 f1 ]7 g* T1 C1 D
应用怎么样的培养技巧可以获得更完美脐带间充质干细胞：2 q- o; C6 V( r, C. g+ t& c
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
* h! d5 u8 D; v- @$ b8 k4 D脐带间充质胶质的备置：9 O$ \: P0 s; ?1 z4 ~1 M
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html' N  c0 ]6 T+ `" _
脐带间充质细胞贴壁法出芽率怎么这么低：2 Z) [, s5 A6 y- D. ~5 N7 C  U
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html4 l  U: V( Q$ T# d4 L9 T
脐带间充质贴壁法到底几天换液：
- t. N( X) F& d1 Xhttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
+ h7 f; O3 }: N" Z各位大虾能把自己养的脐带间充质细胞出来晒晒吗?
. t1 q$ i/ [& T$ Dhttp://www.stemcell8.cn/thread-56179-1-1.html: ?' K$ U+ z; v

湖南干细胞

回复 单个核细胞 的帖子6 D& u2 G) s- q

7 V: W# P1 h6 h" \: u我的细胞基本上没有长成成纤维样的，但是瓶底用FBS铺了，确实是从贴壁9小时添加培养液时就有细胞爬出来，组织块贴壁不紧，常在第一次添加液体时就已经漂了，3-5天后换液细胞状态还可以，再过1、2天，细胞就碎了。是不是组织块贴壁不紧。

湖南干细胞

回复 老姜 的帖子
& c6 f  T, }* S8 |& x' i' K: X$ h$ I: G3 g# x- a
我的组织块贴壁不紧，9小时，第1次添加培养液时就基本上全飘了。后两张是爬出来的细胞，肯定不是皿底的东西，是爬出来的细胞，最一张是细胞碎解了。

老姜

回复 湖南干细胞 的帖子
7 \. b3 t2 R- U! |* T
* |. A) C3 i4 g8 M4 e5 ~43楼的细胞照片，梭形细胞长成大片了在右下角还见组织块了。你再细细琢磨琢磨。