CD3CD56双阳性细胞流式分析-圈门（附图）！！！

lyj-0017

我们培养的CIK细胞做流式细胞检测发现CD3CD56双阳性细胞比例非常低，还不到1%。. E% r3 o) c3 S& d" T! u
第一，怀疑是购买的CD56荧光抗体不对，我买的是BD的鼠抗人CD56-PE抗体（克隆号B159）。不知道大家购买的CD56荧光抗体都是哪家的？以及买的是哪个克隆号的？
: W0 z) G2 T3 `- D2 u, ^3 q" B第二，怀疑是上机时圈门不对，不知道大家FSC/SSC跑出来的图是啥样的？以及圈哪部分细胞？附上我们跑出来的图供大家分析，图1是PBMC，图2是CIK，请大家给分析一下圈门对不对。
+ a- ^7 y9 B" c% E- I多谢拉！
' W% f, |: V! ~# M/ d. u) i; \

各输己键

CD3CD56双阳性细胞是什么细胞呢？你没有贴出那张1%的图来。% d' b- W1 J4 ]* B+ w
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CD3CD56双阳性细胞，应该算是NKT细胞，不是NK也不是T细胞。

rocfield

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6 }7 T1 _/ d& ?( Q* M9 ]2 z/ |) s: d/ e2 E1 n
感觉下图设门不太好，圈上了部分细胞碎片，门再向右一点，可能会好一些，但是如果这样设门检测的双阳细胞不到1%的话，重新设门阳性率也好不到哪儿去。从这个图中看不出CD56抗体有没有问题。

shizaihappy

CIK测CD3CD56双阳率时圈的细胞应该是淋巴细胞，可以加个CD45，要是没有CD3，CD56也够用了

lyj-0017

回复 各输己键 的帖子* T/ ]. s1 r6 `  m4 W4 s

( H  {( p" B, t5 a- c) Z7 m现在把双阳性比例图贴上来，能否发一个你们做的图学习一下呢？

lyj-0017

回复 rocfield 的帖子0 Y( r5 ?* e/ s! s% `( y1 u

6 l4 M7 T3 ?5 \再请看下面贴上来的双阳比例图。能否发一下你们做出来的图学习一下呢？

lyj-0017

回复 shizaihappy 的帖子0 ]! F% s' c0 W% S

% ]$ ?$ j2 x' W& ^. ~. H1 Q是啊，应该是圈淋巴细胞门。能否把你们做的流式图贴上来学习一下呢？

各输己键

lyj-0017 发表于 2013-12-2 20:03
% r( W" ^" w" ^: h3 o/ x2 m回复 各输己键 的帖子& ?* K- y2 _' H( j
; a3 L- f/ U( m3 c+ _. d& L8 O) J
现在把双阳性比例图贴上来，能否发一个你们做的图学习一下呢？

- u. A4 V- P' D! I6 {! n- m
哈哈，我不做这个的。只是碰巧路过。
/ H& e+ }6 \. {1 S9 V; y& x7 L* Q& D9 l. Y( i
你这个应该说圈门，分析还是做的挺好的，细胞培养前后，FSC和SSC是有变化的，因此出现这样的图也是可以理解的，如果担心可以加上活细胞染料；另外，你PE的电压是给低了些吗还是抗体加少了，怎么需要用到Biexponential方式呢？机器是Cantor？
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lyj-0017

回复 各输己键 的帖子) i# J) l7 a* c+ v8 r

: W& k  P3 ~6 ?0 `1、PE电压是由流式细胞仪操作人员设定的，这个我不是太懂。
. |0 c; k6 P  x+ H+ ?) p9 M, Q2、荧光抗体是买的BD的，说明书是按每1X10^6个细胞加入20ul荧光抗体。如果我是5X10^6个细胞也是加20ul抗体，对细胞染色有影响吗？" ?& W8 ?8 ]  z
3、Biexponential是什么意思呢？这个也不懂
  i9 M, W+ e. K4、流式细胞仪用的是BD FACSVerse TM

各输己键

lyj-0017 发表于 2013-12-4 10:47 " O5 E9 U0 y2 W, h4 `& P$ x
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$ N, a2 G7 T) h' C* s
/ p- z$ O) A& B1、PE电压是由流式细胞仪操作人员设定的，这个我不是太懂。

  j, f. W3 v: A对染色的影响不是太大，不过我们一般都会减半使用的，有的可能还要减得更多；Biexponential可以有助于显示细胞群的全貌。你这个图还是挺好的。