CD3CD56双阳性细胞流式分析-圈门（附图）！！！

lyj-0017

我们培养的CIK细胞做流式细胞检测发现CD3CD56双阳性细胞比例非常低，还不到1%。
  [3 L, J9 j! t第一，怀疑是购买的CD56荧光抗体不对，我买的是BD的鼠抗人CD56-PE抗体（克隆号B159）。不知道大家购买的CD56荧光抗体都是哪家的？以及买的是哪个克隆号的？
4 t+ F& {' l# F1 g- c; s8 k第二，怀疑是上机时圈门不对，不知道大家FSC/SSC跑出来的图是啥样的？以及圈哪部分细胞？附上我们跑出来的图供大家分析，图1是PBMC，图2是CIK，请大家给分析一下圈门对不对。* Q/ G9 ]( G1 _7 U
多谢拉！6 f, I, }4 @( i6 ]  b

各输己键

CD3CD56双阳性细胞是什么细胞呢？你没有贴出那张1%的图来。0 K/ k# e, f! @) I' Q

- _0 f. v" i# e8 e2 P+ i- ZCD3CD56双阳性细胞，应该算是NKT细胞，不是NK也不是T细胞。

rocfield

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1 }) l! m7 C6 q感觉下图设门不太好，圈上了部分细胞碎片，门再向右一点，可能会好一些，但是如果这样设门检测的双阳细胞不到1%的话，重新设门阳性率也好不到哪儿去。从这个图中看不出CD56抗体有没有问题。

shizaihappy

CIK测CD3CD56双阳率时圈的细胞应该是淋巴细胞，可以加个CD45，要是没有CD3，CD56也够用了

lyj-0017

回复 各输己键 的帖子) b. Q- K4 A( @# r# C/ t  j

  N: R/ N: F0 a* @现在把双阳性比例图贴上来，能否发一个你们做的图学习一下呢？

lyj-0017

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$ g# M: _4 J6 n7 I9 \
: P0 d4 T% A7 Z7 ^) ~* \再请看下面贴上来的双阳比例图。能否发一下你们做出来的图学习一下呢？

lyj-0017

回复 shizaihappy 的帖子7 H' t2 c5 G2 v+ ^
4 [- G8 Y$ E7 ~5 d5 k
是啊，应该是圈淋巴细胞门。能否把你们做的流式图贴上来学习一下呢？

各输己键

lyj-0017 发表于 2013-12-2 20:03 5 {. }3 u( ~" Y$ L) C( V2 y2 z
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0 h' j" V: d8 e: Q) d2 s( Y% G* q! `# |$ H: x
现在把双阳性比例图贴上来，能否发一个你们做的图学习一下呢？

6 l2 e0 x( D" K& T/ b) R3 d8 d- n
哈哈，我不做这个的。只是碰巧路过。
0 m$ M, ~2 g+ n( \2 b
( G; f- ^7 [! Q  n* c你这个应该说圈门，分析还是做的挺好的，细胞培养前后，FSC和SSC是有变化的，因此出现这样的图也是可以理解的，如果担心可以加上活细胞染料；另外，你PE的电压是给低了些吗还是抗体加少了，怎么需要用到Biexponential方式呢？机器是Cantor？7 k& m% ~+ g, n$ m0 L7 G) j. Z" H

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lyj-0017

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- k  Q1 G3 ?3 M0 w" S' w! a: b8 |
5 D- I- k  q/ S1、PE电压是由流式细胞仪操作人员设定的，这个我不是太懂。
5 V6 }; P" S0 E5 @2、荧光抗体是买的BD的，说明书是按每1X10^6个细胞加入20ul荧光抗体。如果我是5X10^6个细胞也是加20ul抗体，对细胞染色有影响吗？1 c, D8 N# A) p2 j3 v4 }" r/ G" C) Y
3、Biexponential是什么意思呢？这个也不懂: r3 C8 O4 s$ R& l2 _' k+ |* ]
4、流式细胞仪用的是BD FACSVerse TM

各输己键

lyj-0017 发表于 2013-12-4 10:47
: [2 ~9 x7 D. y$ R$ Z$ q& K回复 各输己键 的帖子
% s0 y0 o; D. ^, Q% s  v8 T2 u) @2 {$ ]1 c& ^9 f6 R
1、PE电压是由流式细胞仪操作人员设定的，这个我不是太懂。

3 @7 S, V% }4 q
对染色的影响不是太大，不过我们一般都会减半使用的，有的可能还要减得更多；Biexponential可以有助于显示细胞群的全貌。你这个图还是挺好的。