CD3CD56双阳性细胞流式分析-圈门（附图）！！！

lyj-0017

我们培养的CIK细胞做流式细胞检测发现CD3CD56双阳性细胞比例非常低，还不到1%。
4 n  j: f; R. v3 X1 @第一，怀疑是购买的CD56荧光抗体不对，我买的是BD的鼠抗人CD56-PE抗体（克隆号B159）。不知道大家购买的CD56荧光抗体都是哪家的？以及买的是哪个克隆号的？
( u* s! P/ f  Y# k: g5 \, z. n第二，怀疑是上机时圈门不对，不知道大家FSC/SSC跑出来的图是啥样的？以及圈哪部分细胞？附上我们跑出来的图供大家分析，图1是PBMC，图2是CIK，请大家给分析一下圈门对不对。
7 f4 P) l. B* U' z2 a4 Q多谢拉！" `) d) U" i1 |8 A

各输己键

CD3CD56双阳性细胞是什么细胞呢？你没有贴出那张1%的图来。
7 A6 |" \3 L* a
% J+ W$ \  e8 k- XCD3CD56双阳性细胞，应该算是NKT细胞，不是NK也不是T细胞。

rocfield

回复 lyj-0017 的帖子! S% X- @0 C' i0 A$ j

! R# w* B& b( `0 ^9 D6 _& |' J感觉下图设门不太好，圈上了部分细胞碎片，门再向右一点，可能会好一些，但是如果这样设门检测的双阳细胞不到1%的话，重新设门阳性率也好不到哪儿去。从这个图中看不出CD56抗体有没有问题。

shizaihappy

CIK测CD3CD56双阳率时圈的细胞应该是淋巴细胞，可以加个CD45，要是没有CD3，CD56也够用了

lyj-0017

回复 各输己键 的帖子( d4 U5 f1 v: [
2 u3 G& q5 d1 i- g+ R3 [
现在把双阳性比例图贴上来，能否发一个你们做的图学习一下呢？

lyj-0017

回复 rocfield 的帖子
- t; J4 u4 d& q# L3 ?, I; m" N& J* }& T
再请看下面贴上来的双阳比例图。能否发一下你们做出来的图学习一下呢？

lyj-0017

回复 shizaihappy 的帖子' n- S3 S& z% G1 F- n& N  D" a
) W4 ?, c2 r1 }8 W/ v5 R& Y1 B* q! G
是啊，应该是圈淋巴细胞门。能否把你们做的流式图贴上来学习一下呢？

各输己键

lyj-0017 发表于 2013-12-2 20:03
. y9 t0 i2 D! ]3 o2 C回复 各输己键 的帖子
! U. p. r5 |5 f9 \' C+ M  y6 v8 l0 L. I# J& c# I; z6 {5 g
现在把双阳性比例图贴上来，能否发一个你们做的图学习一下呢？

3 u/ Z: h9 s; O5 E8 y( }
哈哈，我不做这个的。只是碰巧路过。- c# d- T. s, r# ]. C. G# v9 T0 Q

) q% Q2 }1 K% ~2 E5 C4 ]/ V0 k# m你这个应该说圈门，分析还是做的挺好的，细胞培养前后，FSC和SSC是有变化的，因此出现这样的图也是可以理解的，如果担心可以加上活细胞染料；另外，你PE的电压是给低了些吗还是抗体加少了，怎么需要用到Biexponential方式呢？机器是Cantor？( ^) z8 d) a  L% N
! w/ ~" X, i) @9 H4 D: f

lyj-0017

回复 各输己键 的帖子
6 ?! n/ q! f- I% b( A* C7 {4 U8 B" [: O
1、PE电压是由流式细胞仪操作人员设定的，这个我不是太懂。7 x7 h* a, ~  h3 v, l  M, e  k( r
2、荧光抗体是买的BD的，说明书是按每1X10^6个细胞加入20ul荧光抗体。如果我是5X10^6个细胞也是加20ul抗体，对细胞染色有影响吗？! E5 U* x5 I- n8 q# R. O( H) r
3、Biexponential是什么意思呢？这个也不懂
# p( t7 h" d1 ^$ t+ u- W6 m6 ~4、流式细胞仪用的是BD FACSVerse TM

各输己键

lyj-0017 发表于 2013-12-4 10:47
( n# n% h1 U% O; ~( Q9 u1 a回复 各输己键 的帖子- [! T' x- b6 c. m5 s
5 U7 {( p% T0 s' G: W
1、PE电压是由流式细胞仪操作人员设定的，这个我不是太懂。

# H) p& O2 L+ C3 }1 V3 U+ J对染色的影响不是太大，不过我们一般都会减半使用的，有的可能还要减得更多；Biexponential可以有助于显示细胞群的全貌。你这个图还是挺好的。