CD3CD56双阳性细胞流式分析-圈门（附图）！！！

lyj-0017

我们培养的CIK细胞做流式细胞检测发现CD3CD56双阳性细胞比例非常低，还不到1%。4 i- |7 y. K  l+ K6 z# O2 n* [
第一，怀疑是购买的CD56荧光抗体不对，我买的是BD的鼠抗人CD56-PE抗体（克隆号B159）。不知道大家购买的CD56荧光抗体都是哪家的？以及买的是哪个克隆号的？( I4 q3 T* L/ E5 [6 ^8 ~
第二，怀疑是上机时圈门不对，不知道大家FSC/SSC跑出来的图是啥样的？以及圈哪部分细胞？附上我们跑出来的图供大家分析，图1是PBMC，图2是CIK，请大家给分析一下圈门对不对。) L5 T6 d$ @1 X0 }+ t' H
多谢拉！+ @, t# S6 r* [% C# I

各输己键

CD3CD56双阳性细胞是什么细胞呢？你没有贴出那张1%的图来。1 _9 V/ p4 ~3 i3 d" m6 M) P

# c  \. O5 X& Y0 e+ S8 U; YCD3CD56双阳性细胞，应该算是NKT细胞，不是NK也不是T细胞。

rocfield

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; k" w1 ]) b9 Z: t+ A
感觉下图设门不太好，圈上了部分细胞碎片，门再向右一点，可能会好一些，但是如果这样设门检测的双阳细胞不到1%的话，重新设门阳性率也好不到哪儿去。从这个图中看不出CD56抗体有没有问题。

shizaihappy

CIK测CD3CD56双阳率时圈的细胞应该是淋巴细胞，可以加个CD45，要是没有CD3，CD56也够用了

lyj-0017

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9 s8 T$ z0 d) V- e7 U& T
  c8 l) @  `4 Z0 R' j1 Z6 l现在把双阳性比例图贴上来，能否发一个你们做的图学习一下呢？

lyj-0017

回复 rocfield 的帖子4 d; V$ c2 Y% n; T) ^" e8 g

* V' {% }! f% J: `& r- h再请看下面贴上来的双阳比例图。能否发一下你们做出来的图学习一下呢？

lyj-0017

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8 a9 y6 w) ~2 F4 d
) p: c5 l1 S+ u) c3 s" v是啊，应该是圈淋巴细胞门。能否把你们做的流式图贴上来学习一下呢？

各输己键

lyj-0017 发表于 2013-12-2 20:03 4 X. k/ P2 u* x: v8 B% V( y
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' M9 J4 m5 W5 U, t7 f现在把双阳性比例图贴上来，能否发一个你们做的图学习一下呢？

# h7 n6 W2 ], a  R$ W
哈哈，我不做这个的。只是碰巧路过。
5 W1 H. }# S$ C2 H- ~, x8 h) z# }3 o
你这个应该说圈门，分析还是做的挺好的，细胞培养前后，FSC和SSC是有变化的，因此出现这样的图也是可以理解的，如果担心可以加上活细胞染料；另外，你PE的电压是给低了些吗还是抗体加少了，怎么需要用到Biexponential方式呢？机器是Cantor？
; X7 F9 l; l# }& j, j6 S  `" H  b4 ?
0 X& y% s7 l3 i1 w+ w9 c

lyj-0017

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" m8 P. V" Q+ H4 X, h* P. _  q* N
/ X! b; g8 ?/ s7 k6 m  }. h/ V1、PE电压是由流式细胞仪操作人员设定的，这个我不是太懂。( c- l+ D2 Z' Z7 A
2、荧光抗体是买的BD的，说明书是按每1X10^6个细胞加入20ul荧光抗体。如果我是5X10^6个细胞也是加20ul抗体，对细胞染色有影响吗？
" W& u  ?) q- [3、Biexponential是什么意思呢？这个也不懂
; s6 A- Q% s1 x& j+ C6 Y9 I4、流式细胞仪用的是BD FACSVerse TM

各输己键

lyj-0017 发表于 2013-12-4 10:47 ) H5 K; c1 H  P8 a0 J' q# D
回复 各输己键 的帖子# ^# |* V0 l- q! Z5 o9 A  p
% }% A8 M2 B# @5 e& s+ J
1、PE电压是由流式细胞仪操作人员设定的，这个我不是太懂。

; g( l8 W4 U2 p" X9 }% ~对染色的影响不是太大，不过我们一般都会减半使用的，有的可能还要减得更多；Biexponential可以有助于显示细胞群的全貌。你这个图还是挺好的。