CD3CD56双阳性细胞流式分析-圈门（附图）！！！

lyj-0017

我们培养的CIK细胞做流式细胞检测发现CD3CD56双阳性细胞比例非常低，还不到1%。! D# N, A: o: W' d: \  L! J' [' x" F) |
第一，怀疑是购买的CD56荧光抗体不对，我买的是BD的鼠抗人CD56-PE抗体（克隆号B159）。不知道大家购买的CD56荧光抗体都是哪家的？以及买的是哪个克隆号的？
5 |9 R/ j+ l' a; m+ e" J$ F. g; c" o第二，怀疑是上机时圈门不对，不知道大家FSC/SSC跑出来的图是啥样的？以及圈哪部分细胞？附上我们跑出来的图供大家分析，图1是PBMC，图2是CIK，请大家给分析一下圈门对不对。
' d2 e+ n* n& D0 T' A" h/ n多谢拉！8 S) s& _% h: q3 L* e

各输己键

CD3CD56双阳性细胞是什么细胞呢？你没有贴出那张1%的图来。
8 u: V- k: h6 s* }7 h5 R: [, I/ ?% d2 s+ w9 z! ^
CD3CD56双阳性细胞，应该算是NKT细胞，不是NK也不是T细胞。

rocfield

回复 lyj-0017 的帖子% I2 z" E; Z! b/ T3 I" x* i: \

( m( `6 N0 U5 I. B+ ^0 h8 l感觉下图设门不太好，圈上了部分细胞碎片，门再向右一点，可能会好一些，但是如果这样设门检测的双阳细胞不到1%的话，重新设门阳性率也好不到哪儿去。从这个图中看不出CD56抗体有没有问题。

shizaihappy

CIK测CD3CD56双阳率时圈的细胞应该是淋巴细胞，可以加个CD45，要是没有CD3，CD56也够用了

lyj-0017

回复 各输己键 的帖子
6 [# M7 V  B9 f1 \. |8 x
, R/ Q2 {' L9 v1 F+ W( U" A2 N) w现在把双阳性比例图贴上来，能否发一个你们做的图学习一下呢？

lyj-0017

回复 rocfield 的帖子" ^: c  p6 P1 H( l( X7 n
/ ^8 l: p6 h" H* L1 x
再请看下面贴上来的双阳比例图。能否发一下你们做出来的图学习一下呢？

lyj-0017

回复 shizaihappy 的帖子* J3 y+ z& U8 ]

# G' e3 |- e. J( ^+ y0 `0 R+ P( _是啊，应该是圈淋巴细胞门。能否把你们做的流式图贴上来学习一下呢？

各输己键

lyj-0017 发表于 2013-12-2 20:03
  f. m! o8 ?2 e/ n回复 各输己键 的帖子
/ Q' A8 \% \6 g8 p7 a3 i$ p! K" f' b% |4 Q
现在把双阳性比例图贴上来，能否发一个你们做的图学习一下呢？

0 S- v6 ~" d) X! a) ?0 m
哈哈，我不做这个的。只是碰巧路过。$ S0 w% s4 p+ P0 E

! ^: x. a. |: q+ i/ o. ^你这个应该说圈门，分析还是做的挺好的，细胞培养前后，FSC和SSC是有变化的，因此出现这样的图也是可以理解的，如果担心可以加上活细胞染料；另外，你PE的电压是给低了些吗还是抗体加少了，怎么需要用到Biexponential方式呢？机器是Cantor？# y/ q' ]+ \1 L' d% C3 C2 W
' o! t' N) f" i. D) \, v

lyj-0017

回复 各输己键 的帖子! l  D4 u& m# u# `( s6 G
, ]. {. o9 [" h3 r5 l
1、PE电压是由流式细胞仪操作人员设定的，这个我不是太懂。" z4 L& g! M+ d- W! ^
2、荧光抗体是买的BD的，说明书是按每1X10^6个细胞加入20ul荧光抗体。如果我是5X10^6个细胞也是加20ul抗体，对细胞染色有影响吗？4 [4 A; q, v6 z; i
3、Biexponential是什么意思呢？这个也不懂
! v) i0 v6 o7 h4、流式细胞仪用的是BD FACSVerse TM

各输己键

lyj-0017 发表于 2013-12-4 10:47 $ n/ j- g( J# @+ N* o
回复 各输己键 的帖子4 Z8 U8 ~; O" \! `+ a1 L

5 [  H. R& j0 }" q& ]& N. V1、PE电压是由流式细胞仪操作人员设定的，这个我不是太懂。

- _4 c8 g/ R3 j) t对染色的影响不是太大，不过我们一般都会减半使用的，有的可能还要减得更多；Biexponential可以有助于显示细胞群的全貌。你这个图还是挺好的。