手采集外周血培养CIK疑问！！！

lyj-0017

想咨询关于手采外周血培养CIK细胞的几个问题：
5 T, [# K$ j) K1、采集的外周血是先离心富集血细胞，再用生理盐水稀释后加入淋巴细胞分离液进行分离，还是先把外周血进行稀释再加入淋巴细胞分离液进行分离？这两种方式哪种方式更好一些？4 D( ]4 O6 u; k+ _
2、如果采用经典的培养方式，D0 加IFN-r，D1加anti-CD3和IL-2，D0时往培养瓶中加入PBMC后必须经过2小时或者过夜贴壁，然后把悬浮细胞吸出来之后再加anti-CD3和IL-2吗？4 E) w$ \/ N3 d# i- t2 b6 C  V
3、如果贴壁后剩下的细胞用来诱导DC，第7天进行DC与CIK混合培养的话，是将所有的DC全部与CIK进行混合培养，还是将DC按一定的比例与CIK进行混合？1 P) M- F' a  ?2 C- W0 Q, F
/ t/ I+ Y, R  G$ s3 ~
请大家不吝赐教，谢谢哈~

nkcell

这需要看用的是什么牌子的淋巴分离液，还有离心力的大小，前面的方法时间长，对细胞有损伤，后面的对分离液和转数有要求

nkcell

2.是正确的
& r# ^& J! c; C1 |

nkcell

3.是按比例混合的

lyj-0017

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1 U: h/ Y( ?( ~) F- j2 R
+ ^! N6 C6 k; ]2 |请问按照什么比例混合比较合适？

a276038921

个人感觉 先分离富集血细胞比较好 收集细胞量比第二种多

lyj-0017

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  }& v& F& u% [. C( Q+ O% ~0 x# P- E# L, D: y1 v, c1 Y! q
恩，感谢，其余两个问题呢？

levell

1、 先离心，分离出自体血清用于之后的细胞培养，然后血细胞至少1:1加入PBS（生理盐水中细胞状态并不好）稀释，再用淋巴细胞分离液分离单核细胞。8 o& q4 o% {; ^+ a# a4 p2 V
2、2小时贴壁移出悬浮细胞培养，因子添加就按你说的
2 g1 B! U! _! V4 `- _/ T3、将DC按一定的比例与CIK进行混合，一般1:10吧

a276038921

同意楼上的说法

a276038921

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4 L7 T- H) J) N$ n4 n" U4 o% a2 ^5 Z3 P* }; V9 U7 H) v- q
但是DC和CIK混合的时候我是 全部混合在一起培养 这样比较省事个人感觉 主要还是要看你要干什么用了2 ^& y0 t' l( f