分离PBMC时的疑问？

gengtongyu521

分离PBMC时，有时会多吸取一些下方的分离液，以免细胞的浪费，这样，再离心时会不会不容易使单个核细胞离心下来，而悬浮在液体中呢？

Jonathan

不会。因为洗的时候用的是PBS，两个应该是可以互溶的。。
+ p" |% \) T6 c' D) ?

HHvivian

如果有这种顾虑，PBS加多点。我也做过PBMC的分离，但未出现过单个核细胞离心不下来的情况。PBMC的分离还是比较容易的。

defu

操作基本过程如下：9 a  d- Y, t9 @0 U' R( s

# }2 I6 O- a" Q+ J5 q# c0 U+ q2 `1、抗凝血约8ml，2h内收集，混匀充分；
3 [9 B4 s+ u+ e+ Y) y2 O+ I
6 J5 S) ~4 T  ]0 g# k' @+ |2、复温淋巴细胞分离液及1640；（室温自然复温2h或水浴锅中1-5min）
1 p/ U, n# l/ P& W5 n
" a( Y$ y3 }! N, u4 r& s5 H5 r3、2支15ml离心管中各加入4ml淋巴细胞分离液，离心2min离下管壁上液体；! Y6 `5 a3 g* c
5 \9 ~& x1 t/ q$ g4 t
4、将8ml血吸至50ml离心管中，加入约8ml1640，混匀；# C. x) v7 r5 C9 k

; E2 w* L4 a6 ]+ V  t5、使用BD产3ml一次性无菌塑料吸管，将混匀后的血慢慢加到淋巴细胞分离液上；
7 |! N/ J5 r4 x9 A- d4 |* ~* J
6、1600rpm（440g/min），30min离心；; U& @& \5 p' o

# s1 O5 c. L5 t4 Q+ ~4 J; O7、吸取上层血浆，用玻璃吸管吸取PBMC层至一新15ml离心管，加入1640至14ml，混匀；
# b& |2 M" K: ^; S2 C" j; K
3 h' R5 p3 O) u8、1300rpm（290g/min），10min离心；% g7 v( N" i; `6 B+ j7 {
( x3 K% d' H- [/ B1 r" L7 G" N8 @) x
9、同样方法再次洗涤。+ B* I6 Y* e: M8 R  |
  i/ m7 T& w: ]* q3 F& D$ g

pengxuleo

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1 ~; P& P5 H2 \: x+ P. ]
不会的，能不能离心下来要看缓存也的密度啊，你多加PBS洗，这样就稀释了分离液的密度，细胞就可以离心下来了

pengxuleo

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. W$ ]4 x. S; o8 e
不会的，能不能离心下来要看缓存也的密度啊，你多加PBS洗，这样就稀释了分离液的密度，细胞就可以离心下来了

pengxuleo

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/ V0 J  W8 e$ K5 t3 o) I( Y
不会的，能不能离心下来要看缓存也的密度啊，你多加PBS洗，这样就稀释了分离液的密度，细胞就可以离心下来了

easternliu

上面的人吹牛，我之前有遇到，细胞都跑到分离液当中了，所以吸了很多分离液，当时头脑发热没混匀，所以离心出现你说的现象，细胞没下来。所以吸了分离液一定要混匀，尽量不要吸太多分离液，如果没办法太多了，可以适当增加离心转速。关键是要混匀。。。

sunny.yc

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6 E) o5 @' H5 R1 B# ^, `
( ]$ a5 L* _' \% R) T! K多吸一些没关系，只要别吸太多淋巴细胞分离液当中的”杂质“和下面的其他细胞就行了，然后用DPBS或1640混匀一下细胞，完全没有问题，我一直都是这么做的

pengxuleo

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; }+ l2 M5 P- G$ t) v- s. @4 I' q
你说我吹牛也得好好看看内容啊，混不混匀是实验常识问题，没人会专门提出来