BMSC腺病毒感染

liukuantj

各位前辈，我目前正在做GFP腺病毒转染兔的骨髓间充质肝细胞，有几个问题想请教下各位前辈。
0 i: v# U  U- j/ s* a2 n1，我查了文献，大概腺病毒转染Rabbit的MOI大概在200左右，那呢也就是说，我转染一个T25培养瓶（细胞量约为50万个细胞）的话，需要的病毒颗粒是一亿个病毒活性颗粒，我的GFP腺病毒浓度是1*10e11/ml,那么也就是只需要1ul就够了。我想问下，这1ul的病毒液该如何加入到培养基中，是直接加进去，还是先跟培养基预混后再加入。+ X) V  ~# Z/ ?7 R! S6 V- m2 B
2，一般转染的时间要多久？我上次大概转了24h，可是3天后，荧光依然是很弱。
0 ~! i& R4 r0 Z0 y/ B5 v3，是否需要添加prolygrene?怎么加？+ R8 p; F( ?- p; |1 I2 ~. @4 ^, W
4，病毒如何分装比较好，是直接分转成小包装，还是预混培养基后再分装？) D* D2 s3 H) V( \6 c
谢谢！

luyue6453

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9 I5 b1 I# N% e1 |你如果怕1ul不好加，可以把病毒用培养液稀释10倍然后加10ul这样啊，这有什么好纠结的，再一个，不同细胞病毒感染能力都不同，你需要做预实验的，分别几个浓度，几个转让时间测一下，然后才能确定你的最佳操作。

liukuantj

liukuantj 发表于 2014-10-30 20:43
6 j' s3 E. x9 g2 h各位前辈，我目前正在做GFP腺病毒转染兔的骨髓间充质肝细胞，有几个问题想请教下各位前辈。$ s+ Z/ S9 M, ?1 s0 J: q2 g
1，我查了文献 ...

0 j3 _9 M9 ~5 S. e, W谢谢前辈，不知病毒液该如何分装，单独分装，还是跟培养基预混后再分装？我可以吧polybrene一块先和病毒液，以及培养基一块混合后，在分装-80保存？谢谢！

三木一叶

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" c2 E) l0 f5 o- Y" i3 P* [' @8 F7 e& @/ [' G
直接分装就可以了啊，不推荐加其他东西预混后分装，因为万一你还要用这个病毒做其他类型的细胞转染呢？3 Y0 f" l% u+ B8 X
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我最近在做干细胞的转染，好难转啊