CAR-T细胞培养中慢病毒转染的问题

六弦七品

最近养CAR-T细胞转染效率老是上不去，大家病毒滴度一般用多少？转染后细胞状态明显变差，照理说用的慢病毒都是缺陷病毒，不能复制，进入细胞后又不会消耗细胞营养，为什么对细胞损伤这么高？

只因偶然

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( p0 |8 J( o: s* `你好，我做car-t，慢病毒感染后第5天开始细胞生长速度变慢，不知道是什么原因

只因偶然

回复 riverdtang 的帖子5 _6 I1 d9 U7 y* Z) J7 m

* q# Q3 }8 u; q你们测转染率是什么时候测的？为什么我们养的CAR-T，转染第5天后（转染第2天换液），细胞增殖速度变慢，活性下降了呢

jinhaifeng

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请问你们用聚凝胺了吗

riverdtang

回复 六弦七品 的帖子& l0 [9 S4 h$ _2 m9 R; p; n9 k
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启动子试过没有什么明显的差别，还是转染时机影响吧，分离激活后尽早转会好些

六弦七品

回复 winqi 的帖子
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; {0 j. a; \' s% t+ j0 U: R9 }用的CMV，最近准备换ef-1a

六弦七品

回复 riverdtang 的帖子/ V5 x) ], m5 s, V* t
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你们转染效率这么高，我们都用了RetroeNection加polybrene，还是没多少，应该是载体有问题，你们用的那种载体？

ET生物人

回复 riverdtang 的帖子6 s# X" T' B5 @3 d+ K) J% L' J
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你们是用什么培养液的？？怎么转染率这么高，我们感染效率一直都很不稳定。

木子小王令

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恩恩！谢谢大神！" w% q+ w' p% Z- \; ~
我下次试着做个梯度，有问题还请多多指教！！！

riverdtang

回复 木子小王令 的帖子- K) k" t# Y( a  R; X1 P; z
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是的，第九天转那效率肯定不会很高的，我们分离就刺激，浓度看你们所需的细胞种类和抗体质量了，这个需要摸索一下，不过你们可以长到第九天还有10%转染率，那刺激可能不是最大的问题，你可以试下分离2-3天转，可能会好些。悬浮细胞不需要铺板啊，直接转就是了，第二天换液。