小鼠BMSC原代培养经验交流贴~~

angel-sakura

本人原代操作步骤为：1、处死小鼠，75%酒精泡5~10min，并准备3个盛有培养基的皿。% c2 }) u% T  h
2、先初步分离小鼠的股骨、胫骨和肱骨，放入第一个皿中。
( E8 a/ ?# A0 @! J- \  x  T3、仔细出去骨头上的肌肉和筋膜，放入第2个min
$ e1 h( F  W+ d3 T% w4、减去骨的2端，用1ml注射器吸取培养基吹出细胞，只到细胞泛白。/ z9 a2 w( k! _- A9 @: v
5、收集第三个皿中的细胞悬液，800g 5min，去上清
! V0 l: g8 X, y7 O* p5 X6、制备单细胞悬液，接种到一个皿中。+ G2 d( S2 D' R5 @" {
今晚刚做到这里，不知道明天结果如何，以上步骤如有不足的地方欢迎大家指出。
& t/ B8 H& s' K5 K此外，个人觉得仔细分离骨头上的肌肉时，将其放入75%的酒精中泡几秒会比较容易剥离，但至于是否会影响到里面的BMSC还不知道。

china1983chen

学习了，谢谢楼主

angel-sakura

欢迎大家来讨论~~本人也是第一次做原代培养~~

tanhehe1006

有可能有很多造血干细胞的污染的。小鼠骨髓MSC的培养其实和人与大鼠的还是有区别的
. S+ }0 X0 O' t7 f% q: h# N# M你可以参考下面两个文章，都是来自Nature protocol的
  P, i4 ~+ q, @% c. C0 ], Z

china1983chen

我昨天也是第一次做，可是出来的细胞都是圆圆的，不知道是什么细胞

china1983chen

回复 4# tanhehe1006
+ d, W1 n8 B9 t$ @4 e+ j3 R8 e: d  ]: \5 {
, t. }- ^& ?3 r- M' h2 m1 U; Z
    非常感谢，谢谢

tanhehe1006

附上我养出来的小鼠MSC图片吧

bypw

看了楼主的东西和步骤，我觉得大部分是一个常规的操作，但是有机电可能存在问题：) r  d- F0 a1 }: o" |  e5 B2 K6 @

; U1 {$ ~. |, Z$ Q! e- E1  取材上好像很少去肱骨吧，就是前肢，是不是这样效果很好啊
' A5 s/ g. w0 e1 h+ H3 M: T( Z" m' C
2  减去两端，我觉得存在问题，因为干细胞主要存在干骺端，去掉后干细胞将会很少，建议直接穿刺冲。
9 q' u! o6 ?3 t8 ~! S% G" F3  冲出后要轻轻吹打，让细胞混匀，注意轻5 V& f  F8 y: D% N/ j( @/ a1 x
4  不要用酒精泡啊，

jisuyun

MSC是梭性的，你的图片多角形的应该是成纤维细胞哦

china1983chen

回复 7# tanhehe1006
; @  @8 [# X$ r  a
' e/ U9 l) P. @9 g
, i+ B( ~4 f# A* h1 U: h9 h* c    这是原代细胞吗