小鼠BMSC原代培养经验交流贴~~

angel-sakura

本人原代操作步骤为：1、处死小鼠，75%酒精泡5~10min，并准备3个盛有培养基的皿。9 W1 `% [4 V) k- L; h* I1 F8 s
2、先初步分离小鼠的股骨、胫骨和肱骨，放入第一个皿中。
% W% n; a' Q1 r1 Z3、仔细出去骨头上的肌肉和筋膜，放入第2个min
& K0 F- w& m' N! h' K4、减去骨的2端，用1ml注射器吸取培养基吹出细胞，只到细胞泛白。
6 k0 d4 o1 F" i- s  R5、收集第三个皿中的细胞悬液，800g 5min，去上清
% v8 Y- z! f4 J8 z5 E1 y6、制备单细胞悬液，接种到一个皿中。
# X3 ?' V# s" ?  M1 E今晚刚做到这里，不知道明天结果如何，以上步骤如有不足的地方欢迎大家指出。& W: `: ^3 [1 g4 l2 J. f' j
此外，个人觉得仔细分离骨头上的肌肉时，将其放入75%的酒精中泡几秒会比较容易剥离，但至于是否会影响到里面的BMSC还不知道。

china1983chen

学习了，谢谢楼主

angel-sakura

欢迎大家来讨论~~本人也是第一次做原代培养~~

tanhehe1006

有可能有很多造血干细胞的污染的。小鼠骨髓MSC的培养其实和人与大鼠的还是有区别的
* W5 n; S( t  K4 ]- w你可以参考下面两个文章，都是来自Nature protocol的. ]4 {: r6 K1 Y0 ?

china1983chen

我昨天也是第一次做，可是出来的细胞都是圆圆的，不知道是什么细胞

china1983chen

回复 4# tanhehe1006
3 @' t0 N0 a5 y
$ f4 w# x, x" x" \9 @& S0 e- _* N8 G; R3 Y8 ~1 ]0 t* z4 W
    非常感谢，谢谢

tanhehe1006

附上我养出来的小鼠MSC图片吧

bypw

看了楼主的东西和步骤，我觉得大部分是一个常规的操作，但是有机电可能存在问题：
/ u" v+ d3 P7 ^6 _2 n+ H+ c, l. l; S% ^. t8 ~% |& h" H$ m8 m
1  取材上好像很少去肱骨吧，就是前肢，是不是这样效果很好啊; w  i$ G' z( W9 F, p

% U# x7 a8 R% D7 O$ q% `9 h% ~/ E2  减去两端，我觉得存在问题，因为干细胞主要存在干骺端，去掉后干细胞将会很少，建议直接穿刺冲。
- f) Z4 M3 j+ |+ m$ F' P9 x9 u3  冲出后要轻轻吹打，让细胞混匀，注意轻( v  ?6 A  C' z  q
4  不要用酒精泡啊，

jisuyun

MSC是梭性的，你的图片多角形的应该是成纤维细胞哦

china1983chen

回复 7# tanhehe1006
3 t, _# n7 P/ j* T& g+ Q$ t
( h% F: z9 c$ n, n, C7 u. v6 U: `7 X8 X9 U9 u) V9 E; \
    这是原代细胞吗