脐带组织块贴壁法求助

湖南干细胞

谢谢各位指点。

湖南干细胞

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2.26日做了一次组织块贴壁法培养，12小时后添加培养液时就基本上漂浮了，但是还是爬出来很多细胞，3.2日1/3量换液，拍照如上1。3月5日，3月5日镜下观察基本上没细胞了，只有碎片照片2，培养瓶里的组织块全部都漂浮，部分发黄，培养液颜色变得很淡，后2张照片所示。+ D7 C& v0 g- B
这次本来爬出很多细胞，结果还是细胞死亡了，是不是培养液换得不够，细胞营养不足？

单个核细胞

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你确定有细胞从组织周围爬出吗？从你的描述以及照片加上时间推断，不大可能，你注意看一下是不是培养瓶底的东西，而不是你说的“爬出来很多细胞”。5 R( ^+ @3 z/ }) @

3 ?9 d* X$ H8 B4 P- O8 [/ ^3 ]我这里附上一张组织周围爬出细胞的照片，如下图。
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老姜

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4 q8 s2 I. _  F! z* f* {1 N$ {) e照片1你组织块接种的太密，按这个浓度可以两盘种三盘。换液时要从皿边缘轻轻吸出，尽量不要倾斜培养皿，加液要一滴一滴的滴在大组织块上面（以免冲跑爬出的细胞），组织块一般在见到组织块周围有梭形细胞团时再挑出组织块（约10-15天），你下两张照片的组织块呢？这样即使见个别梭形细胞也会死掉的。

老姜

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照片1你组织块接种的太密，按这个浓度可以两盘种三盘。换液时要从皿边缘轻轻吸出，尽量不要倾斜培养皿，加液要一滴一滴的滴在大组织块上面（以免冲跑爬出的细胞），组织块一般在见到组织块周围有梭形细胞团时再挑出组织块（约10-15天），你下两张照片的组织块呢？这样即使见个别梭形细胞也会死掉的。

老姜

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( X3 }  L* W. p# i3 \6 {, |照片1你组织块接种的太密，按这个浓度可以两盘种三盘。换液时要从皿边缘轻轻吸出，尽量不要倾斜培养皿，加液要一滴一滴的滴在大组织块上面（以免冲跑爬出的细胞），组织块一般在见到组织块周围有梭形细胞团时再挑出组织块（约10-15天），你下两张照片的组织块呢？这样即使见个别梭形细胞也会死掉的。

老姜

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43楼的细胞照片，梭形细胞长成大片了在右下角还见组织块了。你再细细琢磨琢磨。

湖南干细胞

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' u( c4 w$ C& m2 X4 O( k我的组织块贴壁不紧，9小时，第1次添加培养液时就基本上全飘了。后两张是爬出来的细胞，肯定不是皿底的东西，是爬出来的细胞，最一张是细胞碎解了。

湖南干细胞

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我的细胞基本上没有长成成纤维样的，但是瓶底用FBS铺了，确实是从贴壁9小时添加培养液时就有细胞爬出来，组织块贴壁不紧，常在第一次添加液体时就已经漂了，3-5天后换液细胞状态还可以，再过1、2天，细胞就碎了。是不是组织块贴壁不紧。

单个核细胞

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组织贴壁9小时就能爬出细胞？你说的是这个意思吗？你可以描述一下你的培养过程，如组织贴壁时间、加液时间、组织周围爬出细胞时间、换液时间等等。这样大家才能知道你的困惑帮你解决问题。0 e4 {/ N# G1 c. L- l) M/ a
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另，参考下面的链接：$ t& Y( k! j# P5 U- V& p7 [8 b
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脐带间充质干细胞的贴壁分离方法：
: w3 a8 I+ |9 X' T7 J! [http://www.stemcell8.cn/forum.ph ... mp;page=1#pid554020' ]  B8 k7 l$ C- ]& W9 J; C# P4 {
请教华通氏胶的剥离：: D: W6 D$ ]& B$ I  B
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html- W, V. ^4 F1 f) G
应用怎么样的培养技巧可以获得更完美脐带间充质干细胞：' F( ?. ?0 K! r
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
) ?( i6 q1 c! C4 K7 b+ ^脐带间充质胶质的备置：  b% q8 C: ]4 w+ N8 G
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html5 m1 |$ t4 T) D( p+ ~5 E
脐带间充质细胞贴壁法出芽率怎么这么低：
0 m7 V( Q7 q% V/ P1 phttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html7 ]- s; T8 z! h
脐带间充质贴壁法到底几天换液：
+ C. t' P" H/ qhttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html! X8 \2 [. q: i0 t# m  z8 Q
各位大虾能把自己养的脐带间充质细胞出来晒晒吗?
$ T5 j4 n& Q+ X3 \8 @http://www.stemcell8.cn/thread-56179-1-1.html4 K: u/ Q! y9 `* R2 }$ @