手采集外周血培养CIK疑问！！！

lyj-0017

想咨询关于手采外周血培养CIK细胞的几个问题：
) R2 \2 s* X8 q$ t) ^7 l1、采集的外周血是先离心富集血细胞，再用生理盐水稀释后加入淋巴细胞分离液进行分离，还是先把外周血进行稀释再加入淋巴细胞分离液进行分离？这两种方式哪种方式更好一些？% o+ `$ g' G! X# o1 e, I9 \3 w
2、如果采用经典的培养方式，D0 加IFN-r，D1加anti-CD3和IL-2，D0时往培养瓶中加入PBMC后必须经过2小时或者过夜贴壁，然后把悬浮细胞吸出来之后再加anti-CD3和IL-2吗？" V1 m# Q6 P% F6 d6 q( X6 C5 [
3、如果贴壁后剩下的细胞用来诱导DC，第7天进行DC与CIK混合培养的话，是将所有的DC全部与CIK进行混合培养，还是将DC按一定的比例与CIK进行混合？
% }' U1 H# B; @9 o2 _8 t( r9 J: x0 Q; z. j4 Q+ f
请大家不吝赐教，谢谢哈~

nkcell

这需要看用的是什么牌子的淋巴分离液，还有离心力的大小，前面的方法时间长，对细胞有损伤，后面的对分离液和转数有要求

nkcell

2.是正确的
% J3 q( e8 a+ s& m

nkcell

3.是按比例混合的

lyj-0017

回复 nkcell 的帖子
8 h- E0 ^7 }! ]" w) d. G
0 P3 C, Z+ M& I4 m+ y- |7 M  Z请问按照什么比例混合比较合适？

a276038921

个人感觉 先分离富集血细胞比较好 收集细胞量比第二种多

lyj-0017

回复 a276038921 的帖子+ {  b+ `9 r* ]  w( `
5 @4 ^- n, g  |% p6 L9 T2 m( o
恩，感谢，其余两个问题呢？

levell

1、 先离心，分离出自体血清用于之后的细胞培养，然后血细胞至少1:1加入PBS（生理盐水中细胞状态并不好）稀释，再用淋巴细胞分离液分离单核细胞。
; _( s. [3 f: Z& o- `2、2小时贴壁移出悬浮细胞培养，因子添加就按你说的; a6 _! j+ ^' [# P. L/ f
3、将DC按一定的比例与CIK进行混合，一般1:10吧

a276038921

同意楼上的说法

a276038921

回复 lyj-0017 的帖子
7 ~/ _4 }. j2 N6 f1 I, `1 P2 k6 p7 [9 I& f3 Q$ C! E+ ~5 W3 ?- ?
但是DC和CIK混合的时候我是 全部混合在一起培养 这样比较省事个人感觉 主要还是要看你要干什么用了% x! o6 `( Q3 W$ ^* h9 ~