手采集外周血培养CIK疑问！！！

lyj-0017

想咨询关于手采外周血培养CIK细胞的几个问题：
* c6 ^" X5 E6 Y3 X  w  H1、采集的外周血是先离心富集血细胞，再用生理盐水稀释后加入淋巴细胞分离液进行分离，还是先把外周血进行稀释再加入淋巴细胞分离液进行分离？这两种方式哪种方式更好一些？
- L9 v6 |( g: B# g' u, l/ p2、如果采用经典的培养方式，D0 加IFN-r，D1加anti-CD3和IL-2，D0时往培养瓶中加入PBMC后必须经过2小时或者过夜贴壁，然后把悬浮细胞吸出来之后再加anti-CD3和IL-2吗？
  \  i$ v+ s6 n: Q  f- K; g  T3、如果贴壁后剩下的细胞用来诱导DC，第7天进行DC与CIK混合培养的话，是将所有的DC全部与CIK进行混合培养，还是将DC按一定的比例与CIK进行混合？
6 m; S& x; z( k
1 O: E8 B8 l: p+ d请大家不吝赐教，谢谢哈~

nkcell

这需要看用的是什么牌子的淋巴分离液，还有离心力的大小，前面的方法时间长，对细胞有损伤，后面的对分离液和转数有要求

nkcell

2.是正确的
5 K- Q. m7 m6 A# }: t" R

nkcell

3.是按比例混合的

lyj-0017

回复 nkcell 的帖子
# ?* P9 J5 f& n2 g: G( @5 K# C
1 I( N+ n: X8 t7 G  t0 D请问按照什么比例混合比较合适？

a276038921

个人感觉 先分离富集血细胞比较好 收集细胞量比第二种多

lyj-0017

回复 a276038921 的帖子8 F4 L+ i" M8 p* V- Z5 x9 ~: d; ?) t

) t3 ]( X8 X& I- Z+ \' P恩，感谢，其余两个问题呢？

levell

1、 先离心，分离出自体血清用于之后的细胞培养，然后血细胞至少1:1加入PBS（生理盐水中细胞状态并不好）稀释，再用淋巴细胞分离液分离单核细胞。. J; i! _* U; p. q$ {' |
2、2小时贴壁移出悬浮细胞培养，因子添加就按你说的
! ]8 N& H! P& u5 P3 w2 f3、将DC按一定的比例与CIK进行混合，一般1:10吧

a276038921

同意楼上的说法

a276038921

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4 t) Y7 |: l3 _) ]7 E' J) V5 R* C7 X5 J0 A' B, i- C0 }5 I; O
但是DC和CIK混合的时候我是 全部混合在一起培养 这样比较省事个人感觉 主要还是要看你要干什么用了
+ K, n4 }+ Y1 `3 y