求助ips复苏的问题

冬天的雪糕

我们现在用的小鼠mef饲养层，复苏is细胞，但是两周了细胞都没有长起来，只有一两个克隆，而且克隆一直没有生长。5 z- [8 f$ ^! J: z; q# {% i
有没有大神试过用饲养层复苏，而不是无饲养层培养液？有什么注意事项或者建议吗？
+ F" Z0 W! w/ ^非常着急！！

nichifanlema2

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9 B$ [6 G6 Z+ Q9 d2 v用DMSO溶解，配成母液，用的时候加入培养基中，终浓度为10uM即可。

watchen198891

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& w2 U- ?7 n3 J2 q* B/ i1 w血清加10%的DMSO或者培养基加30%血清再加10%DMSO。我这样用的，效果还行。血清太贵，后面就改用培养基来代替。复苏的时候没有多大的问题。

watchen198891

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* F7 f7 x8 d5 C$ U; g2 {5 [+ Y" Q- J- [) V  {: I
这个到不是很清楚，一般来说ips克隆足够大了就直接传代或者冻存，至于MEF能够支撑多久我没有注意，ips克隆到一定程度很容易出现分化。我觉得MEF不能够长期支持ips生长，要是你的ips长时间不能够形成克隆状态，那你的细胞应该要检查一下。

冬天的雪糕

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' x, S/ _' `: h. l$ ]( {
" H7 Z# s. z# ~6 }' c8 g我还想请问一下，y27632是用ddh2O溶解吗？浓度多少呢？还有就是10ml培养基的话加入多少y27632比较合适呢？谢谢

冬天的雪糕

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) [1 J" S! n3 v4 w8 [4 h6 u2 A3 _7 z; R# a
还有请问你的冻存液配方是什么呢

冬天的雪糕

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' {8 t3 J! h! k1 T% V我的意思是mef最多可以支持ips生长多久呢？好像听说最多不能超过一周是吗？

watchen198891

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$ L0 H, O7 Z, c. S; z6 HMEF更换是什么意思？是说你铺好没有用可以放多久吗？还是你准备传代的时间？iPS传代时间一般跟你克隆大小确定，当然如果养得比较好的话基本两天就会传代。

冬天的雪糕

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非常感谢; y: G" O- F( u( [4 c6 _

冬天的雪糕

回复 wangshumin12311 的帖子
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比较省钱，嘿嘿