求助ips复苏的问题

冬天的雪糕

我们现在用的小鼠mef饲养层，复苏is细胞，但是两周了细胞都没有长起来，只有一两个克隆，而且克隆一直没有生长。* W8 @- ^+ ?/ u8 \9 g1 I/ y2 ]
有没有大神试过用饲养层复苏，而不是无饲养层培养液？有什么注意事项或者建议吗？8 N; P2 q0 D) ^( c: s+ [# R7 T# U3 w
非常着急！！

nichifanlema2

回复 冬天的雪糕 的帖子
7 D4 D* d- H' L
5 o# G' ~$ E# }7 k% ?4 ~用DMSO溶解，配成母液，用的时候加入培养基中，终浓度为10uM即可。

watchen198891

回复 冬天的雪糕 的帖子) a7 }0 l1 f8 g; y) {0 b; |( t# c
2 M, g* P  a+ W, v
血清加10%的DMSO或者培养基加30%血清再加10%DMSO。我这样用的，效果还行。血清太贵，后面就改用培养基来代替。复苏的时候没有多大的问题。

watchen198891

回复 冬天的雪糕 的帖子' j5 X/ A+ [' G

, g  |$ e7 ]6 Y6 o3 w% {" J% ^9 @这个到不是很清楚，一般来说ips克隆足够大了就直接传代或者冻存，至于MEF能够支撑多久我没有注意，ips克隆到一定程度很容易出现分化。我觉得MEF不能够长期支持ips生长，要是你的ips长时间不能够形成克隆状态，那你的细胞应该要检查一下。

冬天的雪糕

回复 nichifanlema2 的帖子) _+ x' U1 ?8 D* F& y1 u

' i8 @4 n; q, ]我还想请问一下，y27632是用ddh2O溶解吗？浓度多少呢？还有就是10ml培养基的话加入多少y27632比较合适呢？谢谢

冬天的雪糕

回复 watchen198891 的帖子
# e* V$ p* m+ X8 z. |3 N* Q: ^% q, i. O* T; V/ c' i' y- o& v/ f
还有请问你的冻存液配方是什么呢

冬天的雪糕

回复 watchen198891 的帖子. |0 f  T7 n$ V' }/ C

8 s7 y: ]7 [: [4 d+ `, C: I1 l4 {我的意思是mef最多可以支持ips生长多久呢？好像听说最多不能超过一周是吗？

watchen198891

回复 冬天的雪糕 的帖子
$ X1 L6 r& S1 i6 B$ j, U. V' C% ?& R
+ x) \6 }' h, T$ o7 O0 H; o: A  W( E4 XMEF更换是什么意思？是说你铺好没有用可以放多久吗？还是你准备传代的时间？iPS传代时间一般跟你克隆大小确定，当然如果养得比较好的话基本两天就会传代。

冬天的雪糕

回复 nichifanlema2 的帖子
0 Z! k& n" k3 T: O7 w* [" j4 h6 g' v7 ]
非常感谢
5 a9 ?' n- q9 D  G

冬天的雪糕

回复 wangshumin12311 的帖子1 E+ y- p2 U3 N* G, q1 V
$ Q! O/ s& ]1 f) m
比较省钱，嘿嘿